復(fù)蘇

1.從液氨中取出細(xì)胞凍存管，快速將其置入 37°水浴中解凍直至凍存管中無結(jié)晶，75%的酒精擦拭凍存管外壁:

2.將凍存管中的細(xì)胞移至含 6m 培養(yǎng)基的 15ml 離心管中， 1000rpm 離心 5min;

3.棄上清，沉淀用 6ml培養(yǎng)基重懸，接種 25cm2培養(yǎng)瓶，于 37°C，5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

傳代:

(1) 貼壁細(xì)胞:

1. 細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 25cm2 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次。

2. 添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1m 至培養(yǎng)瓶中，倒置微下觀客，待細(xì)胞回縮變圓后加入 5m 培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，將懸濃移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min;

3. 棄上清，沉淀細(xì)胞用 1-2m 培養(yǎng)基重懸，按1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代，補(bǔ)加培養(yǎng)基后放入 37，5%C02 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

   
   

(2) 懸浮細(xì)胞

待細(xì)胞達(dá)到1x10^6/ml左右可按照以下方法換液培養(yǎng)或傳代

方法1:收集細(xì)胞，1000rpm 離心 5min，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按 1: 2到 1: 3的比例分到合培養(yǎng)基的新中.

方法2:豎立放置培養(yǎng)瓶，細(xì)胞沉淀后棄去上半量培養(yǎng)基，將細(xì)胞懸液按 1: 2 到 1: 3 的比例分到含培養(yǎng)基的新瓶中.

凍存:

1.離心收集細(xì)胞并進(jìn)行計(jì)數(shù)(參考離心條件: 1000rpm，5 min)。移去離心管中的上清液

2.加入適量的無血清細(xì)胞凍存液(EK-Bioscience 貨號(hào): S002) 于離心管中，調(diào)整細(xì)胞濃度至1~5x10cells/L。輕柔混，制成細(xì)胞凍存懸液

3將離心管中的細(xì)胞凍存懸液分裝于已標(biāo)示的凍存管中:

4.直接將含細(xì)胞懸液的凍存管放入-80C冰箱，長(zhǎng)期冷凍保存或轉(zhuǎn)入液.